Expressão do gene heterólogo cry1Ab em bactéria diazotrófica endofítica e colonizadora de cana - de - açúcar

Resumo

O desenvolvimento da biologia molecular permitiu que novos produtos biotecnológicos fossem desenvolvidos. Com isso genomas foram seqüenciados e seus genes identificados e manipulados. Concomitantemente, o seqüenciamento do genoma da bactéria diazotrófica endofitica Gluconacetobacter diazotrophicus, abriu novas perspectivas para estudos relacionados à sua genômica e seu uso como vetor de expressão de genes heterólogos. O presente trabalho tem o objetivo de inserir no genoma de G. diazotrophicus o gene cry1Ab, isolado de B. thuringiensis subsp. kurstaki estirpe S76. Este gene é responsável pela produção da delta-endotoxina Cry1Ab, letal para a broca da cana-de-açúcar. A primeira etapa deste trabalho consistiu na sub-clonagem do gene nos vetores comerciais pGEM-T easy e pCC1. Para clonar o gene foi usada a técnica de PCR com iniciadores específicos para o gene cry1Ab e presença de sítios XhoI  para facilitar a ligação do fragmento amplificado nos plasmídeos. O produto amplificado no tamanho de 3,5 Kb foi ligado com sucesso nos vetores comerciais. A próxima etapa consiste na sub-clonagem do gene cry1Ab no plasmídeo pTnMod-OGmGusA. Este novo plasmídeo será inserido em Escherichia coli DH10B pela técnica de eletroporação com o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria expressar a proteína heteróloga Cry1Ab. Baseado na produção da proteína, a construção será transferida para G. diazotrophicus para avaliar a capacidade da mesma em produzir a delta-endotoxina.