Amplificação por reação em cadeia da polimerase e clonagem de regiões promotoras de genes nif/ntr de Gluconacetobacter diazotrophicus.

Resumo

Gluconacetobacter diazotrophicus é uma bactéria endofítica diazotrófica originalmente isolada do interior de plantas de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum), mas também já foi encontrada em arroz (Oryza sativa), batata-doce (Ipomoea batatas), capim-elefante (Pennisetum purpureum), café (Coffea arábica) e abacaxi (Ananas comosus). É uma bactéria aeróbica, Gram-negativa, capaz de fixar nitrogênio na presença de nitrato e crescer em baixos valores de pH. Sua capacidade de promover o crescimento vegetal através da Fixação Biológica de Nitrogênio (FBN) tem motivado várias pesquisas, no intuito de se conhecer os mecanismos que regem a interação bactéria-planta e o fenômeno da fixação de nitrogênio. Neste contexto, o presente trabalho tem por objetivo a amplificação e clonagem de possíveis regiões promotoras de genes responsáveis pela fixação de nitrogênio e sua regulação (nif/ntr) através da técnica de PCR e outras técnicas em biologia molecular. Foram amplificadas com sucesso 13 possíveis regiões promotoras de genes nif/ntr. Duas destas regiões promotoras (porf (pré-nifA) e pnifA) foram clonadas em E. coli utilizando o vetor p-GEM T Easy® (PROMEGA) e a clonagem confirmada pela extração do DNA plasmidial e análises de restrição. Outras duas regiões promotoras estão em processo de confirmação da clonagem, através de análises de restrição e seqüenciamento de DNA. Outras etapas consistirão em proceder a clonagem das regiões promotoras restantes que já se encontram amplificadas.