Quantificação de espécies de Herbaspirillum em co-cultivo utilizando PCR em tempo real

Resumo

O inoculante misto recomendado para cana-de-açúcar é composto por cinco diferentes estirpes de bactérias isoladas da própria cultura: Gluconacetobacter diazotrophicus (estirpe BR11281T), Herbaspirillum seropedicae (BR11335), Herbaspirillum rubrisubalbicans (BR11504), Nitrospirillum amazonense (BR11145) e Paraburkholderia tropica (BR11366T). Em escala industrial, sua produção pode oferecer limitações, visto que a maioria das biofábricas não possui estrutura para cultivar estas cinco estirpes isoladamente de forma eficiente. Portanto, o trabalho teve como objetivo a obtenção de células em co-cultivo das espécies Herbaspirillum seropedicae (BR11335) e H. rubrisubalbicans (BR11504) com a finalidade de otimizar a produção do inoculante. O co-cultivo das estirpes foi realizado em biorreator de bancada nas condições de crescimento pré-estabelecidas de 35°C, 150 rpm e aeração de 5,0 e 6,0 L min-1. Utilizou-se um meio previamente otimizado, no qual glicerol é a única fonte de carbono. Para garantir a viabilidade do procedimento, a quantidade de cada espécie de bactérias capaz de crescer nos ensaio em co-cultivo estão sendo quantificados via PCR em tempo real. Foram desenhados primers para fragmentos específicos do genoma de cada estirpe para avaliar a dinâmica de crescimento destas e, sobretudo, verificar se não há inibição de uma estipe em detrimento a outra.