Utilização da técnica de BOX-PCR para verificação da eficiência de colonização em plantas de feijão-caupi inoculadas com a estirpe BR 3262 veiculada em goma amilácea.

Resumo

O feijão-caupi é utilizado no nordeste do Brasil como fonte alimentar devido a seu alto valor nutritivo. A capacidade do feijão-caupi em fixar nitrogênio é um grande atrativo para a expansão do cultivo para além das áreas nordestinas. Este trabalho buscou verificar a partir de BOX-PCR a eficiência da colonização pela estirpe BR3262 utilizada como inoculante para feijão-caupi utilizando um veículo alternativo a base de goma de amido. No controle as sementes foram tratadas apenas com a goma de amido. As plantas foram crescidas em tubetes contendo solo. Os nódulos coletados foram desinfestados superficialmente com etanol (92,8%) e hipoclorito de sódio (4–6%), seguido por lavagens em água destilada autoclavada. Posteriormente estes foram macerados em água ultrapura; 10µl desta suspensão foi espalhado em meio YMA. Após a purificação dos isolados foram preparadas suspensões de células. Para a reação de PCR 2µl de suspensão de células foi adicionado a 23µl de mix (água de PCR, buffer, MgCl₂, dNTP, Primer BOX A1R, Taq); as amostras foram levadas ao termociclador onde foram submetidos a ciclos de temperatura para amplificação das regiões repetitivas BOX. As amostras já amplificadas foram aplicadas em gel de agarose (2%) que foi submetido a voltagem de 75V por 5 horas. O gel foi corado com brometo de etídeo e descorado em água. A visualização das bandas e registro fotográfico foi realizada em fotodocumentador e a análise de similaridade utilizou o programa BioNumerics; o coeficiente de similaridade e o método aplicado foram de Jaccard e UPGMA, respectivamente. Foram analisados 13 isolados de nódulos de plantas inoculadas com BR3262 dos quais 7 apresentaram similaridade com a BR 3262 de referência. Das 13 estirpes isoladas de nódulos de plantas controle somente 2 apresentaram perfis similares à estirpe de referência. Os resultados obtidos sugerem que a estirpe BR 3262 é capaz de colonizar um alto percentual de nódulos de plantas de feijão-caupi.