Isolamento de bactérias presentes no líquido do apoplasto de diferentes variedades de cana-de-açúcar

Resumo

Há evidências de que a cana‑de‑açúcar é beneficiada pela interação com bactérias diazotróficas sendo as espécies G. diazotrophicus, H. seropedicae, H. rubrisubalbicans, A. amazonense e B. tropica as mais frequentes isoladas de variedades cultivadas no Brasil. As mesmas têm sido encontradas colonizando endofiticamente os tecidos das raízes e do colmo assim como do líquido de apoplasto que é bastante rico em açúcares e aminoácidos e possui um pH ao redor de 5,5. Neste sentido, o estudo objetivou isolar bactérias presentes no líquido do apoplasto para posterior avaliação da diversidade e potencial biotecnológico das estirpes.  O fluido do aplasto foi extraído de 8 variedades de cana-de-açúcar (RB 867515, RB 92579, IACSP5000, RB72454, CTC15, SP813250, SP701143 e RB935744) com 6, 9 e 12 meses de idade. Cerca de 100 microlitros foram inoculados nos meios semissólidos NFB, JNFB, LGI e LGI-P e incubados por 7 dias a 30°C. Além disso, foi usado o meio semissólido M9C que possui nove fontes de carbono e pH 5,5 - similar ao do líquido do apoplasto. Foram utilizadas 2 repetições biológicas e 4 repetições técnicas por coleta. Os resultados do estudo mostraram uma baixa ocorrência de bactérias diazotróficas nas diferentes cultivares de cana-de-açúcar. Também não houve diferença no isolamento com a idade da planta. Foram observadas películas, indicativo de presença de bactérias diazotróficas, em poucos frascos contendo os diferentes meios de cultivo. Nem mesmo o meio M9C permitiu o enriquecimento das bactérias. A tentativa de enriquecer o cultivo através da inoculação de meio M9C líquido com liquido de apoplasto e posterior transferência para meio semissólido não logrou sucesso. Por outro lado, a semeadura do líquido do apoplasto em meio M9C sólido mostrou a ocorrência de grande quantidade de bactérias, as quais permitiram formar uma coleção de 1400 isolados. Os resultados sugerem que nas condições testadas a ocorrência de bactérias  diazotróficas no líquido do apoplasto é baixa.