Perfil de celulases e hemicelulases de actinobactérias isoladas do trato intestinal de Trigoniulus corallinus (Diplopoda) em cultivo em bagaço de cana-de-açúcar

Resumo

A capacidade de digestão de material ligninocelulósico por insetos, vem atraindo a atenção da comunidade científica, por ser esta uma mediadora da conversão da biomassa a biocombustíveis. O diplópode Trigoniulus corallinus possui grande capacidade de fracionamento, ingestão e decomposição de materiais lignocelulósicos, sendo utilizado como fonte de prospecção de microrganismos celulolíticos. O objetivo deste trabalho foi a avaliação do perfil de celulases e hemicelulases produzidas por actinobactérias cultivadas em bagaço de cana-de-açúcar. Para tal, três isolados identificados como Kitasatospora sp. foram inoculados em meio líquido, contendo bagaço de cana de açúcar a 5%, incubados por 11 dias a 30°C e120 RPM, parâmetros estes obtidos em estudos anteriores.Transcorrido o tempo de incubação, o sobrenadante foi coletado, purificado por centrifugação a 16100 g X 5’ e estocado em freezer a -80°C. O conteúdo enzimático presente no sobrenadante foi concentrado adicionando-se 80% de acetona e impregnado com tampão amostra contendo 3% SDS e então aplicado no gel de SDS-PAGE e zimograma correspondente. Para avaliação do perfil de celulases, foi adicionado ao gel carboxi-metil-celulose (CMC) a 0,2% e hemicelulases, xilana de faia (Beechwood xylan) a 0,3% em gel a 12,5% de poliacrilamida. A eletroforese foi procedida por 5 horas a 15V/cm de gel seguido de coloração dos zimogramas com solução de Congo Red a 0,1% por 30min. No zimograma para celulases foi possível observar a presença de cinco bandas de massa molecular entre 75 e 100Kda e para hemicelulases seis bandas com massa molecular aproximada de 50 a 150 kda. Foi possível isolar onze enzimas hidrolíticas que estão em fase de identificação e caracterização para futura utilização em processos de obtenção de agrobioenergia.