Utilização do vetor pBBRp1264 para expressão do gene heterólogo cry1Ab em bactéria diazotrófica endofítica e colonizadora de cana - de - açúcar Gluconacetobacter diazotrophicus

Resumo

A cana-de-açúcar é uma das principais culturas do agronegócio brasileiro. No entanto, a sua produtividade é reduzida por diversos fatores bióticos e abióticos, em especial o ataque de insetos-praga. O uso atual da biotecnologia tem contornado estes problemas, por exemplo através da expressão de proteínas heterólogas cry em organismos geneticamente modificados. Em 2009, o seqüenciamento do genoma da bactéria diazotrófica endofitica Gluconacetobacter diazotrophicus, abriu novas perspectivas para a utilização desta como célula hospedeira para a expressão de genes cry. O presente trabalho tem o objetivo de inserir no genoma de G. diazotrophicus o gene cry1Ab, isolado de B. thuringiensis subsp. kurstaki estirpe S76. Este gene é responsável pela produção da proteína tóxica Cry1Ab, que é letal para a broca da cana-de-açúcar. A primeira etapa deste trabalho consistiu na sub-clonagem do gene nos vetores comerciais pGEM-T easy e pCC1, utilizando a técnica de PCR. A etapa seguinte, em andamento, consiste na posterior clonagem no vetor de expressão pBBR1p264. Este novo plasmídeo será inserido em Escherichia coli DH10B pela técnica de eletroporação com o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria expressar a proteína heteróloga Cry1Ab. Confirmada essa capacidade a construção será transferida para células de G. diazotrophicus para avaliar a capacidade desta em controlar lagartas da broca da cana.

19/10 – Sexta-feira tarde