Extração e análise proteômica celular da estirpe selvagem e das estirpes mutantes de Gluconacetobacter diazotrophicus

Resumo

O proteoma reflete a expressão funcional de um genoma e sua caracterização nos fornece informações das vias metabólicas em determinada espécie de bactéria, por exemplo, além de inúmeras relações indispensáveis para um entendimento mais completo do estabelecimento da interação bactéria/hospedeiro/habitat. A Gluconacetobacter diazotrophicus, é uma bactéria com capacidade de fixação biológica de nitrogênio (FBN) atmosférico em um sistema endofítico cujo genoma foi sequenciado e já foram obtidos diversos mutantes associados a suas vias metabólicas, como por exemplo, a produção de ácidos orgânicos/metabolismo de glicose. O intuito desse estudo foi analisar o perfil proteômico da estirpe selvagem G. diazotrophicus PAL-5 em relação aos mutantes que possuem interrupção nos genes de um proteína transmembrana de função desconhecida (16D10), PQQ-glicose desidrogenase (K314 e K416) e NADH-quinona oxirredutase cadeia M (16G6).  As estirpes cultivadas em triplicada em meio líquido de sais de LGI-P suplementado com glicose e condições de FBN, foram coletas no 4º, 5º e 6º dia de crescimento para análise de redução do acetileno (ARA) e obtenção do lisado celular por meio de sonicação. As proteínas totais foram quantificadas pelo método de Bradford, e 400 ug de proteínas de cada estirpe foram submetidas à Isoeletrofocalização (IEF). Em seguida, as tiras IEF foram equilibradas e submetidas à segunda dimensão em SDS-PAGE. Os géis foram corados com coomassie blue coloidal e após descoloração as imagens foram obtidas por ImageScanner III. As imagens foram analisadas utilizando Image Master v 7.0, sendo encontrados valores médios de 350 spots da estirpe selvagem (PAL-5) e mutantes 16G6 e 16D10, enquanto os mutantes K314 e K416 apresentaram valores médios da ordem de 570. A ARA demonstrou atividade de FBN em todas as estirpes. As análises comparativas da expressão diferencial do perfil proteômico entre as estirpes selvagens e às mutantes serão apresentadas.